PENGUJIAN AVIAN INFLUENZA DENGAN TEKNIK PCR
PENGUJIAN AVIAN INFLUENZA DENGAN TEKNIK PCR
(Polymerase Chain Reaction)
(Polymerase Chain Reaction)
PERSIAPAN
- Preparasi Sampel dan Reagen
Persiapan sampel
· Spesimen berupa organ,swab kloaka dan trachea, cairan
allantois atau material yang diduga mengandung virus AI
·
Spesimen organ digerus (dihomogenisasi) dan
ditambahkan PBS
· Sentrifuge untuk memperoleh supernatan sebagai sampel
untuk ektraksi RNA
- Pengenceran Primer
· Primer masih beku dibuat untuk konsentrasi 200 picomol.
· Ditambahkan NFW, DEPC, TE Buffer sebanyak yang dibutuhkan
· Di aliquout (dibagi-bagi) primer stok kedalam beberapa
tabung mikrotube
· Untuk membuat dengan konsentrasi yang lebih rendah
diambil 1 aliquout primer stok untuk diencerkan sesuai dengan konsentrasi yang
diinginkan dengan menambahkan NFW, DEPC, TE buffer sesuai kebutuhan.
·
Penyimpanan
pada – 20oC
Rumus
pengenceran Primer
a. Pengenceran primer Beku (200 picomol)
V
|
=
|
___ C ____
|
|
200
|
Keterangan:
V= Volume DEPC, NFW, TE buffer yang dibutuhkan untuk pengenceran
C= Konsentrasi primer beku dalam satuan picomol (konsentrasi awal dalam
satuan nanomol atau nmol x 1000).
M 1 . V 1 = M 2. V 2
Keterangan:
M1 = Konsentrasi awal primer stok (200 picomol)
M2 = Konsentrasi primer yang diinginkan
V1 = Volume primer stok yang
dibutuhkan
V2 = Volume primer yang diinginkan
(V2 = V1 + volume NFW, DEPC, TE buffer yang digunakan untuk mengencerkan)
